Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (PBS) jest roztwór buforowy jest to powszechnie stosowane do barwienia immunohistochemicznego (IHC) i jest często wykorzystywane w badaniach biologicznych. PBS to wodny roztwór soli zawierający wodorofosforan sodu, chlorek sodu, aw niektórych przypadkach chlorek potasu i diwodorofosforan potasu.
Barwienie immunohistochemiczne
Immunohistochemia odnosi się do procesu wykrywania antygenów, takich jak białka w komórkach a skrawek tkanek przy użyciu zasady przeciwciał wiążących się specyficznie z antygenami w środowisku biologicznym tkanki. Barwienie immunofluorescencyjne było pierwszą metodą barwienia immunohistochemicznego.
Antygeny stają się widoczne po sprzężeniu z przeciwciałami przy użyciu barwników fluorescencyjnych z powodu reakcja wiązania antygenu i przeciwciała. Proces ten zachodzi, gdy jest aktywowany przez ekscytujące światło o określonej długości fali pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Osmolarność i stężenia jonów w roztworach odpowiadają stężeniom ludzkiego ciała - są izotoniczne.
Przepis na bufor PBS
Możesz przygotować PBS na kilka sposobów. Istnieje wiele formuł. Niektóre z nich nie zawierają potasu, podczas gdy inne zawierają wapń lub magnez.
Ten przepis jest stosunkowo łatwy. To jest dla roztworu podstawowego 10X PBS (0,1 mln). Możesz jednak również przygotować roztwór podstawowy 1X lub rozpocząć od przepisu 10X i rozcieńczyć go do 1X. Cały proces zajmuje około 10 minut, a także dostępna jest opcja dodania Tween.
Co będzie potrzebne do utworzenia bufora PBS
- Fosforan sodu jednozasadowy (bezwodny)
- Fosforan sodu dwuzasadowy (bezwodny)
- Chlorek sodu
- Skaluj i waż łodzie
- Mieszadło magnetyczne i mieszadło
- Sonda pH, która jest skalibrowana i odpowiednie rozwiązania do regulacji pH
- 1 l kolba miarowa
- Tween 20 (opcjonalnie)
Jak zrobić bufor PBS
- Odważyć 10,9 g bezwodnego fosforanu sodu dwuzasadowego (Na2HPO4), 3,2 g bezwodnego fosforanu sodu jednozasadowego (NaH2PO4) i 90 g chlorku sodu (NaCl). Rozpuścić w nieco poniżej 1 l wody destylowanej.
- Doprowadzić pH do 7,4 i doprowadzić roztwór do końcowej objętości 1 l.
- Rozcieńczyć 10X przed użyciem i ponownie wyregulować pH, jeśli to konieczne.
- Możesz zrobić roztwór PBS zawierający 0,5% Tween 20, dodając 5 ml Tween 20 do 1 l roztworu.
Wskazówki dotyczące tworzenia bufora PBS
Przechowuj bufor w temperaturze pokojowej po przygotowaniu roztworu PBS.
Odczynniki niewodne mogą być podstawione, ale będziesz musiał ponownie obliczyć odpowiednią masę każdego z nich, aby pomieścić dodane cząsteczki wody.
Zastosowania bufora PBS
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem ma wiele zastosowań, ponieważ jest izotoniczna i nietoksyczna dla większości komórek. Może być stosowany do rozcieńczania substancji i często służy do płukania pojemników z komórkami. PBS może być stosowany jako rozcieńczalnik w różnych metodach do suszenia biocząsteczek, ponieważ zawarte w nim cząsteczki wody będą zbudowane wokół substancji - na przykład białka. Zostanie „wysuszony” i unieruchomiony na twardej powierzchni.
PH pozostaje stałe i spójne, aby zapobiec niszczeniu komórek.
Cienka warstwa wody, która wiąże się z substancją, zapobiega denaturacji lub innym zmianom konformacyjnym. Bufory węglanowe można stosować do tego samego celu, ale z mniejszą skutecznością.
PBS można również wykorzystać do pomiaru widma odniesienia podczas pomiaru białko adsorpcja w elipsometrii.