Bufor TBE (Tris-boran-EDTA) to roztwór buforowy złożony z zasady Tris, kwasu borowego i EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy). Bufor ten jest często stosowany do elektroforezy w żelu agarozowym w analizie produktów DNA powstałych w wyniku amplifikacji PCR, protokołów oczyszczania DNA lub eksperymentów klonowania DNA.
TBE Zastosowania
Bufor TBE jest szczególnie przydatny do oddzielania mniejszych fragmentów DNA (MW <1000), takich jak małe produkty enzym restrykcyjny trawi. TBE ma większą pojemność buforowania i daje ostrzejszą rozdzielczość niż bufor TAE. Bufor TAE (Tris-octan-EDTA) to roztwór złożony z zasady Tris, kwasu octowego i EDTA.
TBE jest na ogół droższy niż TAE i hamuje ligazę DNA, co może powodować problemy, jeśli planowane są kolejne etapy oczyszczania DNA i ligacji. Wykonaj trzy proste kroki, aby dowiedzieć się, jak zrobić bufor TBE. Utworzenie nie powinno zająć więcej niż około 30 minut.
Czego potrzebujesz
Aby stworzyć bufor TBE, potrzebujesz tylko czterech substancji. Pozostałe pozycje na tej liście to wyposażenie. Cztery wymagane substancje to sól disodowa EDTA, zasada Tris, kwas borowy i woda dejonizowana.
Jeśli chodzi o sprzęt, potrzebujesz miernika pH i standardów kalibracji, odpowiednio. Dodatkowo będziesz potrzebować około 600-mililitrowych i 1500-mililitrowych zlewek lub kolb. Uzupełnieniem twoich potrzeb sprzętowych są wyskalowane cylindry, pręty mieszające i płyty mieszające.
Sprawdź zapasy w laboratorium, z którego będziesz korzystać, aby upewnić się, że masz wszystko, czego potrzebujesz, zanim zaczniesz. Nie ma nic gorszego niż konieczność zatrzymywania się w trakcie przygotowywania rozwiązania, ponieważ zabrakło odpowiednich materiałów.
Jeśli twoje laboratorium znajduje się w szkole lub miejscu pracy, skontaktuj się z odpowiednim personelem, aby sprawdzić, czy wszystkie elementy są w magazynie. Takie postępowanie może ostatecznie zaoszczędzić czas i energię.
Waga mieszanki jest skracana jako FW. Jest to masa atomowa elementu pomnożona przez liczbę atomów każdego pierwiastka we wzorze, a następnie sumowane wszystkie masy każdego pierwiastka.
Roztwór podstawowy EDTA
Rozwiązanie EDTA powinno zostać przygotowane wcześniej. EDTA nie przejdzie całkowicie do roztworu, dopóki pH nie zostanie dostosowane do około 8,0. W przypadku 500-mililitrowego roztworu podstawowego 0,5 M EDTA odważyć 93,05 gramów soli disodowej EDTA (FW = 372,2). Następnie rozpuść go w 400 mililitrach dejonizowanej wody i wyreguluj pH za pomocą NaOH (wodorotlenek sodu). Następnie uzupełnij roztwór do końcowej objętości 500 mililitrów.
Roztwór podstawowy TBE
Zrób stężony (5x) roztwór podstawowy TBE, ważąc 54 gramy bazy Tris (FW = 121,14) i 27,5 gramów kwasu borowego (FW = 61,83) i rozpuszcza się oba w około 900 mililitrach dejonizowanego woda. Następnie dodaj 20 mililitrów 0,5 M (molarność lub stężenie) EDTA (pH 8,0) i dostosuj roztwór do końcowej objętości 1 litra. Roztwór ten można przechowywać w temperaturze pokojowej, ale osad powstanie w starszych roztworach. Przechowuj bufor w szklanych butelkach i wyrzuć, jeśli utworzył się osad.
Działające rozwiązanie TBE
Do elektroforezy w żelu agarozowym można zastosować bufor TBE o stężeniu 0,5x (rozcieńczenie stężonego roztworu podstawowego 1:10). Rozcieńczyć roztwór podstawowy 10 razy w wodzie dejonizowanej. Końcowe stężenia substancji rozpuszczonych wynoszą 45 mM Tris-boran i 1 mM (milimolowy) EDTA. Bufor jest teraz gotowy do użycia w prowadzenie żelu agarozowego.