Bufor TAE jest roztworem złożonym z zasady Tris, kwasu octowego i EDTA (Tris-octan-EDTA). Jest historycznie najczęstszym buforem stosowanym do żelu agarozowego elektroforeza w analizach produktów DNA pochodzących z PCR wzmocnienie, DNA protokoły oczyszczania lub Klonowanie DNA eksperymenty.
Bufor ten ma niską siłę jonową i niską pojemność buforowania. Najlepiej nadaje się do elektroforezy dużych (> 20 kilobaz) kawałków DNA i będzie wymagał częstej wymiany lub recyrkulacji na dłuższy (> 4 godziny) czas żelowania. Mając to na uwadze, możesz rozważyć wykonanie kilku partii bufora.
Biorąc pod uwagę, że bufor jest łatwy do wykonania, a etapy można wykonać szybko, tworzenie więcej niż jednej partii na raz nie powinno być szczególnie czasochłonne lub trudne. Wykonanie poniższych instrukcji powinno zająć tylko 30 minut, aby wykonać bufor TAE.
Czego potrzebujesz do bufora TAE
Ponieważ wykonanie bufora TAE wymaga jedynie szybkiego i prostego zestawu instrukcji, liczba potrzebnych materiałów nie jest nadmierna. Potrzebujesz tylko soli disodowej EDTA (kwas etylenodiaminotetraoctowy), zasady Tris i lodowatego kwasu octowego.
Wykonanie bufora wymaga również miernika pH i standardów kalibracji, odpowiednio. Będziesz także potrzebował 600 mililitrów i 1500 mililitrów zlewek lub kolb, a także cylindrów miarowych. Na koniec będziesz potrzebować dejonizowanej wody, mieszadeł i mieszadeł.
W poniższych instrukcjach masę wzoru (masę atomową każdego pierwiastka mnoży się przez liczbę atomów, a następnie dodaje się masę każdego z nich) w skrócie FW.
Przygotuj roztwór podstawowy EDTA
Rozwiązanie EDTA jest przygotowywane z wyprzedzeniem. EDTA nie przejdzie całkowicie do roztworu, dopóki pH nie zostanie dostosowane do około 8,0. Dla zapasu o pojemności 500 mililitrów roztwór 0,5 M (molarność lub stężenie) EDTA, odważyć 93,05 gramów soli disodowej EDTA (FW = 372,2). Rozpuścić w 400 ml dejonizowanej wodzie i wyregulować pH za pomocą wodorotlenku sodu (NaOH). Uzupełnij roztwór do końcowej objętości 500 mililitrów.
Stwórz własne rozwiązanie magazynowe
Przygotuj stężony (50x) roztwór podstawowy TAE, odważając 242 gramy zasady Tris (FW = 121,14) i rozpuszczając ją w około 750 mililitrach dejonizowanej wody. Ostrożnie dodaj 57,1 mililitrów kwasu lodowatego i 100 mililitrów 0,5 M EDTA (pH 8,0).
Następnie dostosuj roztwór do końcowej objętości 1 litra. Ten roztwór podstawowy można przechowywać w temperaturze pokojowej. PH tego buforu nie jest regulowane i powinno wynosić około 8,5.
Przygotuj działające rozwiązanie buforu TAE
Roztwór roboczy 1x buforu TAE wytwarza się po prostu rozcieńczając roztwór podstawowy 50 razy w wodzie dejonizowanej. Końcowe stężenia substancji rozpuszczonej wynoszą 40 mM (milimolarnie) octan Tris i 1 mM EDTA. Bufor jest teraz gotowy do użycia przy uruchamianiu żelu agarozowego.
Podsumowanie
Sprawdź spis zanim zaczniesz się upewnić, że masz wszystkie powyższe materiały do bufora TAE. Twój personel dostawczy powinien być w stanie powiedzieć ci, czy ma wszystkie potrzebne produkty w magazynie. Nie chcesz, aby coś przegapiło w trakcie procedury.