10X bufor buforowy elektroforezy TBE lub przepis

click fraud protection

TBE i TAE są stosowane jako bufory w biologii molekularnej, przede wszystkim dla elektroforeza kwasów nukleinowych. Bufory Tris stosuje się w lekko zasadowych warunkach pH, ​​jak w przypadku elektroforezy DNA, ponieważ utrzymuje to DNA rozpuszczalny w roztworze i deprotonowany, więc będzie przyciągany do elektrody dodatniej i będzie migrował przez żel. EDTA jest składnikiem rozwiązania, ponieważ jest to powszechne środek chelatujący chroni kwasy nukleinowe przed degradacją przez enzymy. EDTA chelatuje dwuwartościowe kationy, które są kofaktorami nukleaz, które mogą zanieczyścić próbkę. Ponieważ jednak kation magnezowy jest kofaktorem polimerazy DNA i enzymów restrykcyjnych, stężenie EDTA utrzymuje się celowo na niskim poziomie (około 1 mM).

Nie musisz sterylizować roztworu. Chociaż opady mogą wystąpić po pewnym czasie, roztwór podstawowy jest nadal użyteczny. Możesz wyregulować pH za pomocą miernika pH i wkroplonego stężonego kwas solny (HCl). Dobrze jest przechowywać bufor TBE w temperaturze pokojowej, chociaż możesz przefiltrować roztwór podstawowy przez filtr 0,22 mikrona, aby usunąć cząsteczki, które sprzyjałyby wytrącaniu.

instagram viewer

Przypadkowe zastosowanie 5-krotnego lub 10-krotnego roztworu podstawowego da słabe wyniki, ponieważ wytworzy się tyle ciepła. Oprócz niskiej rozdzielczości próbka może ulec uszkodzeniu.

Chociaż TBE i TAE są powszechnymi buforami do elektroforezy, istnieją inne opcje dla roztworów przewodzących o niskiej molowości, w tym buforu boranu litu i buforu boranu sodu. Problem z TBE i TAE polega na tym, że bufory oparte na Tris ograniczają pole elektryczne, które można wykorzystać w elektroforezie, ponieważ zbyt duże ładunki powodują niekontrolowaną temperaturę.

instagram story viewer