Roztwór soli buforowany fosforanem lub roztwór PBS

PBS lub buforowany fosforanem sól fizjologiczna jest roztwór buforowy jest to szczególnie cenne, ponieważ naśladuje stężenie jonów, osmolarność i pH płynów ustrojowych człowieka. Innymi słowy, jest izotoniczny dla roztworów ludzkich, więc jest mniej prawdopodobne, że spowoduje uszkodzenie komórki, toksyczność lub niepożądane wytrącanie w badaniach biologicznych, medycznych lub biochemicznych.

Istnieje kilka przepisów na przygotowanie rozwiązania PBS. Niezbędny roztwór zawiera wodę, wodorofosforan sodu i chlorek sodu. Niektóre preparaty zawierają chlorek potasu i diwodorofosforan potasu. EDTA można również dodawać do preparatu komórkowego, aby zapobiec zlepianiu się.

Sól fizjologiczna buforowana fosforanem nie jest idealna do stosowania w rozwiązaniach to zawiera dwuwartościowe kationy (Fe²⁺, Zn²⁺), ponieważ mogą wystąpić opady. Jednak niektóre roztwory PBS zawierają wapń lub magnez. Pamiętaj też, że fosforan może hamować reakcje enzymatyczne. Zwróć szczególną uwagę na tę potencjalną wadę podczas pracy z DNA. Chociaż PBS jest doskonały do ​​nauk fizjologicznych, należy pamiętać, że fosforan w próbce buforowanej PBS może wytrącić się, jeśli próbka zostanie zmieszana z etanolem.

Typowy skład chemiczny 1X PBS ma końcowe stężenie 10 mM PO₄³⁻, 137 mM NaCl i 2,7 mM KCl. Oto końcowe stężenie odczynników w roztworze:

W zależności od celu możesz przygotować 1X, 5X lub 10X PBS. Wiele osób po prostu kupuje tabletki buforowe PBS, rozpuszcza je w wodzie destylowanej i dostosowuje pH w razie potrzeby z kwasem solnym lub wodorotlenek sodu. Jednak rozwiązanie jest łatwe od zera. Oto przepisy na 1X i 10X roztwór soli buforowany fosforanem:

1. Rozpuścić sole odczynników w 800 ml wody destylowanej.
2. Doprowadzić pH do pożądanego poziomu za pomocą kwasu solnego. Zwykle jest to 7,4 lub 7,2. Użyj pH-metru do pomiaru pH, a nie papieru pH lub innej nieprecyzyjnej techniki.
3. Dodaj wodę destylowaną, aby uzyskać końcową objętość 1 litra.

Sterylizacja nie jest konieczna w przypadku niektórych aplikacji, ale jeśli ją sterylizujesz, dozuj roztwór do podwielokrotności i autoklawuj przez 20 minut przy ciśnieniu 15 psi (1,05 kg / cm²) lub zastosować sterylizację filtracyjną.

Sól fizjologiczna buforowana fosforanem może być przechowywane w temperaturze pokojowej. Może być również chłodzony, ale może to być roztwór 5X i 10X wytrącić po ochłodzeniu. Jeśli musisz schłodzić stężony roztwór, najpierw przechowuj go w temperaturze pokojowej, aż upewnisz się, że sole całkowicie się rozpuściły. Jeśli wystąpią opady, ocieplenie temperatury przywróci je z powrotem do roztworu. Okres ważności roztworu chłodzonego wynosi 1 miesiąc.

10X jest stężonym lub podstawowym roztworem, który można rozcieńczyć, aby uzyskać roztwór 1X lub normalny. Roztwór 5X należy rozcieńczać 5 razy, aby uzyskać normalne rozcieńczenie, natomiast roztwór 10X należy rozcieńczać 10 razy.

Aby przygotować 1 litr roztworu roboczego 1X PBS z roztworu 10X PBS, dodaj 100 ml 10X roztworu do 900 ml wody. Zmienia to tylko stężenie roztworu, a nie gramową lub molową ilość odczynników. PH powinno pozostać niezmienione.

Innym popularnym roztworem buforowym jest sól fizjologiczna buforowana fosforanem Dulbecco lub DPBS. DPBS, podobnie jak PBS, jest wykorzystywany do badań biologicznych i buforów w zakresie pH 7,2 do 7,6. Można go przechowywać w temperaturze pokojowej. Roztwór Dulbecco zawiera niższe stężenie fosforanu. Jest to 8,1 mM jonów fosforanowych, podczas gdy zwykły PBS to 10 mM fosforanów. Przepis na 1x DPBS to:

Rozpuścić sole w 800 ml wody. Doprowadzić pH do 7,2 do 76 za pomocą kwasu solnego. Doprowadzić końcową objętość do 1000 ml za pomocą wody. Autoklaw w temperaturze 121 ° C przez 20 minut.

• Dulbecco, R.; i in. (1954). "Tworzenie płytki nazębnej i izolacja czystych linii za pomocą wirusów poliomyelitis". JOT. Exp. Med. 99 (2): 167–182.
• „Roztwór buforowany fosforanami (PBS.) Protokoły z Cold Spring Harbor (2006). Prasa laboratoryjna Cold Spring Harbor.